抑菌效力检查：检测项目与方法详解

一、检测项目分类与原理

1. • 目的：模拟产品被微生物污染后，测定防腐剂对微生物的杀灭或抑制作用。
   • 关键步骤：
     • 接种微生物：选择标准菌株（如金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉等），按一定浓度（通常为 105∼106 CFU/mL105∼106CFU/mL）添加到待测样品中。
     • 时间点检测：在预设时间（如0、7、14、28天）取样，通过平皿计数法或膜过滤法检测存活微生物数量。
     • 结果判定：计算菌落数下降对数值（Log值），如细菌需下降≥3 Log（7天）、真菌≥1 Log（14天），且28天内持续抑制。
2. • 目标菌种：根据不同产品类型选择特定致病菌，如：
     • 滴眼液：铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌。
     • 注射剂：需无菌要求，通常不适用抑菌效力测试（除非含防腐剂）。
   • 方法：采用选择性培养基或分子生物学技术（如PCR）检测是否含有限定微生物。
3. • 检测手段：高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）等定量分析防腐剂实际浓度，确保其在有效范围内。

二、检测方法选择

1. 平皿计数法：适用于非抑菌性基质（如乳膏），直接涂布计数。
2. 膜过滤法：针对液体样品，通过过滤去除防腐剂后培养残留微生物。
3. 最大可能数法（MPN）：用于低微生物负荷样品的概率统计。

三、影响因素与关键控制点

1. 产品理化性质：pH、粘度、乳化状态可能影响防腐剂活性。
2. 微生物种类：细菌芽孢、真菌孢子耐受力强，需延长观察周期。
3. 接种均一性：确保微生物在样品中分散均匀，避免局部失活。
4. 中和剂选择：在培养前需中和防腐剂，防止假阴性结果（如使用卵磷脂、吐温80）。

四、国际标准与评价依据

• USP ⟨51⟩：要求细菌在14天内下降3 Log，28天不反弹；酵母/霉菌14天内不增殖。
• EP 5.1.3：分类为“A（强效）”至“D（无效）”，根据Log下降值分级。
• ChP 1121：与USP类似，强调28天的持续抑菌能力。

• 细菌：14天下降≥2 Log，28天≥3 Log。
• 真菌：28天菌落数≤初始值。

五、应用场景与案例分析

1. 多剂量注射剂：含苯酚或间甲酚的产品需通过挑战试验证明有效期内的抑菌能力。
2. 外用制剂（乳膏/凝胶）：易滋生真菌，需额外检测黑曲霉的抑制效果。
3. 滴眼液：重点关注铜绿假单胞菌（常见污染源）的杀灭速度。

六、