1. 试验设计要点
- 动物模型：成年健康豚鼠（通常选用白化品系，如Hartley豚鼠），雌雄各半或单一性别。
- 分组设计：
- 试验组：受试物+弗氏完全佐剂（FCA，用于增强免疫应答）。
- 对照组：阴性对照（如生理盐水）、阳性对照（如己基肉桂醛，用于验证试验有效性）。
- 剂量选择：通过预试验确定“最大耐受剂量”（无全身毒性但可引发刺激的浓度）。
2. 核心检测项目
（1）诱导阶段（致敏阶段）
- 皮肤反应评分：
- 红斑与水肿：按国际标准评分（如Magnusson评分法，0-3分分级）； 示例：
- 0分：无反应；
- 1分：轻度红斑或水肿；
- 3分：重度红斑伴融合性水肿。
- 观察频率：于首次注射后24、48小时记录局部皮肤反应。
- 红斑与水肿：按国际标准评分（如Magnusson评分法，0-3分分级）； 示例：
（2）激发阶段（挑战阶段）
- 二次皮肤反应评估：
- 时间间隔：诱导后14天，于豚鼠未处理侧（如对侧背部）给予亚刺激剂量受试物。
- 观察指标：激发后24、48、72小时的红斑和水肿评分，判断迟发型超敏反应（DTH）。
（3）致敏率计算
- 判定标准：激发阶段中，试验组动物出现≥1分反应的个体比例。
- 致敏强度分级：根据致敏率分为弱致敏（0-8%）、中度致敏（9-28%）、强致敏（29-64%）、极强致敏（≥65%）。
3. 扩展检测项目（可选）
- 组织病理学检查：
- 采样：取激发部位皮肤样本，进行HE染色。
- 观察指标：表皮海绵样水肿、淋巴细胞浸润等过敏相关病理变化。
- 免疫学指标检测：
- 血清IgE/IgG：通过ELISA法检测抗体水平变化。
- 淋巴细胞增殖试验：分离脾脏淋巴细胞，测定受试物刺激后的增殖能力（如MTT法）。
4. 结果分析与验证
- 阴性/阳性对照验证：阳性对照组应显示显著致敏率（如≥60%），阴性对照组应无反应。
- 统计学处理：采用卡方检验或Fisher精确检验比较组间差异，确认受试物致敏性。
5. GPMT的局限性及替代方法
- 局限性：耗时长（约3周）、动物使用量较大，可能低估某些化学物的致敏性（如金属盐类）。
- 替代试验：局部淋巴结试验（LLNA，OECD 442B），通过检测淋巴结细胞增殖减少动物数量。
总结
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