亚急性全身毒性检测：核心检测项目解析

一、实验设计

1. • 常用物种：大鼠（SD、Wistar）、小鼠（ICR、BALB/c）、犬或非人灵长类（根据产品类型选择）。
   • 年龄与性别：通常选用健康成年动物，雌雄各半，以评估性别差异。
   • 动物数量：每组至少10只，确保统计学意义。
2. • 设置3-4个剂量组（高、中、低）和对照组（溶媒对照或空白对照）。
   • 高剂量组通常基于急性毒性试验的LD50值或最大耐受剂量（MTD）确定。
3. • 途径：模拟人体暴露方式（口服灌胃、静脉注射、吸入、皮肤敷贴等）。
   • 周期：连续给药14-28天，每日固定时间点进行。

二、观测指标

1. • 行为学变化：活动度、步态、呼吸频率、毛发状态等。
   • 毒性症状记录：震颤、腹泻、流涎、眼睑下垂等特异性反应。
   • 死亡率与濒死状态：每日记录存活情况，分析剂量-反应关系。
2. • 体重变化：每周至少2次称重，绘制生长曲线，判断代谢异常或消耗性疾病。
   • 摄食量与饮水量：计算每日摄入量，评估受试物对食欲或消化功能的影响。
3. • 血常规参数：红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、白细胞（WBC）及分类（中性粒细胞、淋巴细胞）、血小板（PLT）。
   • 凝血功能：凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）。
4. • 肝功能：ALT、AST、ALP、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBIL）。
   • 肾功能：血尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）、尿酸（UA）。
   • 代谢指标：血糖（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）。
   • 电解质平衡：钠（Na⁺）、钾（K⁺）、氯（Cl⁻）、钙（Ca²⁺）。
5. • 理化性质：尿量、颜色、pH值、比重。
   • 生化指标：尿蛋白、葡萄糖、潜血、酮体、胆红素。
   • 沉渣镜检：红细胞、白细胞、管型、结晶。
6. • 脏器称重：心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、性腺等（脏器重量/体重×100%）。
   • 大体病理观察：充血、水肿、结节、坏死等肉眼可见病变。

三、组织病理学检查

1. • 根据前期试验或同类物质毒性数据，重点检查肝、肾、造血系统、免疫器官等。
   • 对异常脏器（如肿大或萎缩）进行组织切片。
2. • 常规HE染色：评估细胞变性、坏死、炎症浸润、纤维化等。
   • 特殊染色：如Masson（胶原纤维）、PAS（糖原）、油红O（脂质沉积）。

四、功能性检测（必要时）

1. 免疫毒性：脾淋巴细胞增殖试验、NK细胞活性、免疫球蛋白定量。
2. 神经毒性：运动协调性测试（转棒实验）、脑组织乙酰胆碱酯酶活性。
3. 氧化应激指标：SOD、GSH、MDA水平检测。

五、数据分析与评估

1. • 使用ANOVA或非参数检验分析组间差异（如p<0.05判定为显著）。
   • 计算NOAEL（未观察到有害作用剂量）和LOAEL（最低观察到有害作用剂量）。
2. • 综合血液学、生化及病理结果，确定毒性靶器官及可逆性。
   • 评估剂量-效应关系和时间依赖性。

六、遵循的国际标准

• OECD 407：化学品28天重复剂量经口毒性试验。
• ICH S4：药物非临床重复给药毒性试验指南。
• ISO 10993-11：医疗器械亚慢性全身毒性测试规范。