对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）检测

对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒（Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus，IHHNV）是威胁对虾养殖业的重大病原体之一。该病毒主要感染凡纳滨对虾、斑节对虾等重要经济品种，可导致幼虾生长迟缓、表皮畸形及造血组织坏死，亚成体和成虾感染后虽不致死但会显著降低养殖产量。近年来随着种苗跨境流通频繁，IHHNV的早期检测已成为保障养殖安全、控制疫病传播的核心环节。

一、检测项目核心内容

IHHNV检测涵盖病毒筛查、定量分析及基因分型三个维度：
1. 病原筛查：通过核酸检测确定样本中病毒存在
2. 病毒载量测定：评估感染强度及传播风险
3. 基因型鉴定：区分地理株系以追溯传播路径

二、主流检测技术体系

1. 分子生物学检测
• 巢式PCR检测：针对389bp的IHHNV特异性基因片段，灵敏度达10²拷贝/μL
• 实时荧光定量PCR：可同时进行定性和定量分析，检测下限低至10拷贝/反应
• LAMP快速检测：适用于现场筛查，30分钟即可获取结果

2. 免疫学检测
• 单克隆抗体ELISA：检测病毒衣壳蛋白，适用于批量样本筛查
• 免疫层析试纸条：实现15分钟快速现场检测

3. 组织病理学检测
通过H&E染色观察鳃丝、肝胰腺等组织的特征性核内包涵体，配合电镜观察病毒粒子形态学特征。

三、样本采集规范

1. 优先采集部位：游泳足基节组织、鳃丝、肝胰腺
2. 取样要求：活体取样后立即置于RNA保护液或95%酒精
3. 运输条件：干冰保存（-20℃以下）运输，避免反复冻融

四、检测结果判读要点

• PCR阳性样本需结合Ct值判断感染阶段：Ct≤30为强阳性，30 • ELISA检测需设置阳性对照消除非特异性反应
• 组织病理学阳性应结合分子检测确认

五、防控建议

1. 建立种苗检疫制度：要求SPF（无特定病原）认证
2. 强化生物安全管理：实施养殖池彻底消毒规程
3. 开发RNA干扰疫苗：针对病毒复制关键基因设计抑制剂
4. 构建区域监测网络：建立病毒基因数据库追踪变异趋势

目前水产养殖组织已将IHHNV列入必检病原名录，采用ISO/TS 15216-2:2013标准进行检测认证。随着CRISPR检测技术的突破，未来有望实现1小时内超敏检测，为对虾养殖业提供更强大的疫病防控支撑。