1. 传统培养法

• 前增菌：样本（如食品、环境拭子）加入无选择性培养基（如FB1培养基），恢复受损菌活性（37℃，24-48h）。
• 选择性增菌：转种至含抗生素的选择性培养基（如FB2培养基，抑制杂菌生长，37℃，24h）。
• 分离培养：划线接种于显色培养基（如CHROMagar™李斯特菌琼脂），菌落呈蓝绿色，周围有白色晕圈（磷脂酶活性）；或牛津琼脂（黑色菌落，因水解七叶苷）。
• 生化鉴定：过氧化氢酶试验（阳性）、溶血试验（羊血琼脂β-溶血）、糖发酵试验（鼠李糖、木糖利用差异）。
• 协同溶血试验：与金黄色葡萄球菌共培养显示“伞状溶血”特征。

2. 分子生物学检测

• 常规PCR：扩增目标基因后电泳分析（灵敏度约10³ CFU/g）。
• 实时荧光定量PCR（qPCR）：结合TaqMan探针或SYBR Green，定量检测（灵敏度达10¹ CFU/g），可区分活/死菌（结合叠氮溴化乙锭预处理）。
• 多重PCR：同时检测李斯特菌属及单核细胞增生种（如靶向iap属基因和hlyA种基因）。
• 环介导等温扩增（LAMP）：恒温快速检测（1小时），肉眼观察浑浊度或荧光信号，适用于现场筛查。
• 全基因组测序（WGS）：用于溯源分析及耐药基因鉴定。

3. 免疫学检测

• 酶联免疫吸附试验（ELISA）：商业化试剂盒（如VIDAS® LMO2）可半定量检测，灵敏度约10⁴ CFU/mL。
• 免疫磁珠分离（IMS）：用抗体包被磁珠富集细菌，提高后续检测效率。
• 胶体金免疫层析试纸条：快速定性（15-20分钟），适用于基层或现场初筛。

4. 快速自动化检测系统

• 生物传感器：如表面等离子体共振（SPR）、电化学传感器，实时监测细菌-抗体结合信号。
• 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）：通过蛋白质指纹图谱快速鉴定纯培养菌落（≤5分钟）。
• 流式细胞术：结合荧光标记抗体，快速计数细菌。

1. • 重点食品：即食肉制品、乳酪、生鲜果蔬、即食海鲜。
   • 标准限量：多数国家规定即食食品中不得检出（25g样品中阴性）。
   • 企业自控：加工环境（如传送带、冷库）的涂抹监测（每周采样）。
2. • 样本类型：血液、脑脊液、胎盘组织、新生儿拭子。
   • 危急病例：需同步分子检测（如脑脊液PCR）以缩短诊断时间。
3. • 食品工厂排水系统、通风设备、冷链运输环节的定期检测。

1. 灵敏度与特异性：临床样本需高灵敏度（如qPCR），而环境筛查可采用快速试纸条。
2. 检测时效：疫情暴发时优先分子法，常规监控可结合培养法确认。
3. 成本与设备：基层实验室适合ELISA或LAMP，大型机构可选择自动化平台。
4. 法规要求：进出口食品需符合目的国标准（如美国FSIS要求培养法确认）。