非洲马瘟（African Horse Sickness, AHS）是由非洲马瘟病毒引起的一种高致死性虫媒传染病，主要感染马、骡、驴等马科动物，通过库蠓等吸血昆虫传播。该病被世界动物卫生组织（WOAH）列为必须通报的疫病，对马产业和国际贸易具有重大威胁。非洲马瘟的临床表现包括高热、皮下水肿、呼吸困难及内脏出血等，死亡率可达50%-95%。近年来，随着气候变化和跨境动物流动增加，非疫区国家面临输入性风险显著上升。快速、准确的实验室检测是防控该病的关键环节，也是疫区净化、疫苗效果评估及国际贸易检疫的核心依据。

非洲马瘟检测的主要项目与技术

针对非洲马瘟的实验室检测需遵循WOAH《陆生动物诊断试验和疫苗手册》标准，主要分为病原学检测和血清学检测两大体系，结合临床症状与流行病学调查进行综合判断。

1. 病原学检测

（1）病毒分离培养：采集发热期动物的抗凝血、脾脏或肺组织样本，接种于Vero、BHK-21等敏感细胞系或通过脑内接种乳鼠进行病毒增殖。该方法虽为"金标准"，但需在生物安全三级实验室操作，耗时约7-14天。

（2）RT-PCR检测：针对病毒基因组节段7（VP7基因）设计特异性引物，通过实时荧光定量PCR可在4小时内完成检测，最低检出限达10个病毒拷贝/μL。最新开发的multiplex RT-PCR可同步鉴别不同血清型。

（3）电子显微镜观察：采用负染技术直接观察病毒颗粒的二十面体结构（直径约70nm），适用于急性期样本的快速初筛。

2. 血清学检测

（1）ELISA试验：包括间接ELISA和竞争ELISA两种形式，检测血清中的特异性IgG抗体。欧盟认证的ID Screen® AHS Competition ELISA试剂盒特异性达99.8%，适用于大规模筛查。

（2）病毒中和试验（VNT）：使用活病毒或假病毒系统检测中和抗体效价，能区分疫苗免疫抗体与野毒感染抗体。需在生物安全三级实验室操作，试验周期5-7天。

（3）免疫荧光试验（IFA）：通过感染细胞爬片与待检血清反应，观察特异性荧光信号。快速诊断卡（LFD）可在田间15分钟内获得初步结果。

3. 基因分型与进化分析

针对病毒基因组高变区（VP2基因）进行全基因测序，结合生物信息学工具构建系统发育树，可追溯疫情来源、监测病毒变异。纳米孔测序技术（MinION）已实现现场实时测序分析。

样本采集与运输规范

急性期优先采集EDTA抗凝血（4mL）和脾脏组织，恢复期采集血清样本。运输需使用三重包装系统，保持4℃冷链（病毒分离样本需-80℃冷冻）。跨境送检须遵守《国际危险品运输规则》UN3373标准。

当前非洲马瘟检测技术正向自动化、数字化方向发展，如微流控芯片整合核酸提取与检测全流程，人工智能辅助的病理图像分析系统等。检测实验室需定期参加WOAH组织的国际能力验证，确保检测结果的互认。在非疫区国家，建议对进口马匹实施21天隔离期，并采用"双试剂平行检测"策略以降低漏检风险。