引言

一、检测项目分类

1. 初步筛选：通过培养基特征或快速试纸法判断是否存在目标菌。
2. 确认鉴定：结合生化试验、分子生物学或免疫学方法确认菌种。
3. 毒力基因分析：评估菌株致病性（如毒素基因检测）。
4. 药敏试验：指导临床抗生素使用（针对耐药菌株）。

二、各致病菌的检测方法

1. 大肠杆菌（Escherichia coli）

• 常规检测：
  • 选择性培养基：麦康凯琼脂（MAC）或伊红美蓝琼脂（EMB），菌落呈金属光泽。
  • 生化试验：吲哚试验、MR-VP试验、β-葡萄糖醛酸酶（GUD）检测。
• 毒力检测：
  • PCR检测：肠毒素基因（如stx1、stx2）、致病型（如ETEC、EHEC）特异性基因。
  • 免疫学方法：ELISA检测志贺毒素（Shiga toxin）。
• 快速检测： 免疫层析试纸（如乳胶凝集法）、荧光定量PCR（qPCR）。

2. 沙门菌（Salmonella spp.）

• 分离培养：
  • 富集培养：缓冲蛋白胨水（BPW）增菌，后接种于XLD琼脂或SS琼脂。
  • 典型菌落：透明或黑色中心（含硫化氢）。
• 生化鉴定： 三糖铁（TSI）试验（斜面红/底层黄，产H₂S）、赖氨酸脱羧酶试验。
• 血清学分型： 多价O抗原和H抗原凝集试验。
• 分子检测： invA基因（沙门菌特异靶点）PCR检测。

3. 乙型溶血链球菌（β-hemolytic Streptococcus）

• 溶血特征： 血琼脂平板上完全溶血（β溶血环）。
• 分型鉴定：
  • 兰斯菲尔德分群：乳胶凝集试验检测A群（如化脓链球菌）、B群（无乳链球菌）。
  • 杆菌肽敏感性：A群链球菌敏感（0.04 U杆菌肽纸片）。
• 分子检测： emm基因分型或16S rRNA测序。

4. 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）

• 选择性培养基： 十六烷基三甲基溴化铵（Cetrimide）琼脂，菌落呈蓝绿色（色素扩散）。
• 生化特征： 氧化酶阳性、42℃生长试验阳性。
• 毒力因子检测： 弹性蛋白酶（lasB基因）、绿脓菌素（pyocyanin）的PCR或HPLC分析。
• 快速检测： 环介导等温扩增（LAMP）技术。

5. 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）

• 分离培养： Baird-Parker琼脂（黑色菌落伴浑浊环）或甘露醇盐琼脂（黄色菌落）。
• 凝固酶试验： 玻片法（结合血浆凝固）或试管法（金黄色葡萄球菌阳性）。
• 毒素检测：
  • 肠毒素：ELISA或免疫磁珠法检测SEA-SEE。
  • PVL毒素：PCR检测lukS/F-PV基因（与严重感染相关）。
• 耐药性检测： MRSA（甲氧西林耐药菌）检测（mecA/C基因或头孢西丁纸片法）。

三、检测方法比较

四、应用领域

1. 食品安全：检测食品（肉类、乳制品）中的沙门菌、金黄色葡萄球菌。
2. 临床诊断：血/痰标本中乙型溶血链球菌、铜绿假单胞菌的分离与药敏分析。
3. 水质监测：水中大肠杆菌作为粪便污染的指示菌。
4. 院内感染控制：环境表面铜绿假单胞菌的溯源检测。

五、检测标准与质量控制

• 国际标准： ISO 6579（沙门菌）、ISO 16649（大肠杆菌）、CLSI药敏指南。
• 质控要点： 阳性对照菌株（如ATCC标准菌株）、避免交叉污染、定期校准设备。

六、未来发展趋势

• 自动化检测：全自动微生物鉴定系统（如VITEK 2）。
• 纳米技术：基于纳米材料的生物传感器提升灵敏度。
• 宏基因组测序：直接分析复杂样本中的微生物群落。