一、TSV检测的核心意义

1. 疫情早期预警：及时发现感染个体，阻断病毒传播链。
2. 种苗检疫：确保亲虾和虾苗无病毒感染，保障养殖安全。
3. 进出口监管：满足国际检疫标准，避免贸易损失。
4. 流行病学研究：追踪病毒变异与传播规律，优化防控策略。

二、TSV检测的主要项目与方法

1. 临床症状与病理观察

• 检测目标：初步判断感染迹象。
• 方法：
  • 外观检查：感染虾体表出现红色斑点、尾扇发红、软壳、游动无力等。
  • 组织病理学分析：采集鳃、肝胰腺等组织，通过石蜡切片染色（如H&E染色），观察细胞核固缩、坏死等病变。
• 特点：成本低但特异性差，需结合其他检测确认。

2. 分子生物学检测

• • 原理：提取病毒RNA，逆转录为cDNA后扩增靶基因（如TSV衣壳蛋白基因VP1）。
  • 步骤：
    1. 样本处理：取虾的游泳足、鳃或肝胰腺组织匀浆。
    2. RNA提取与逆转录。
    3. PCR扩增后电泳分析，通过条带大小判断结果。
  • 优势：灵敏度高（可检测10^2拷贝/μL），适用于早期感染。
  • 局限：需专业设备，操作复杂，耗时4-6小时。
• • 原理：结合荧光探针实时监测扩增过程，定量病毒载量。
  • 应用：评估感染强度及病程进展，适用于科研与精准防控。
  • 特点：灵敏度比常规RT-PCR高10倍，可区分病毒亚型。
• • 原理：在恒温（60-65℃）下快速扩增靶序列。
  • 优势：无需昂贵设备，1小时内出结果，适合现场检测。
  • 商业化试剂盒：部分厂商提供便携式LAMP试剂盒。

3. 免疫学检测

• • 原理：利用TSV特异性抗体（如单克隆抗体）捕获病毒蛋白，通过酶标二抗显色。
  • 样本类型：血淋巴或组织匀浆液。
  • 特点：适用于批量样本筛查，灵敏度中等，需配备酶标仪。
• • 原理：胶体金标记抗体与病毒结合，显色条带判读结果。
  • 步骤：将组织液滴加至试纸条，15分钟内观察结果。
  • 优势：操作简单、快速（20分钟），适合养殖场现场使用。
  • 局限：灵敏度低于PCR，可能出现假阴性。

4. 环境样本检测

• 检测对象：养殖水体、沉积物、饵料或工具表面。
• 方法：
  • 浓缩富集技术：超滤离心法浓缩水体中的病毒颗粒。
  • 结合RT-PCR：检测环境中的病毒残留，评估消杀效果。

5. 新兴检测技术

• • 原理：利用Cas12a/Cas13a蛋白的特异性切割活性，结合荧光或试纸条信号输出。
  • 进展：实验阶段灵敏度达到1拷贝/μL，未来或成快速诊断突破点。
• • 应用：全基因组测序分析病毒变异株，追溯疫情源头。
  • 场景：暴发疫情后的溯源研究或疫苗研发。

三、检测方法的选择策略

四、检测流程标准化要点

1. 样本采集：优先选择濒死虾或刚死亡的个体（病毒载量高）；避免反复冻融。
2. 质量控制：设立阴性/阳性对照，防止假结果。
3. 生物安全：检测实验室需符合生物安全二级（BSL-2）标准，防止病毒扩散。

五、未来发展趋势

• 便携式一体化设备：集成核酸提取、扩增与检测，实现“样本进-结果出”。
• 多重检测技术：同时筛查TSV、WSSV（白斑病毒）、IHHNV（传染性皮下及造血组织坏死病毒）等病原。
• 大数据预警平台：结合检测数据与养殖环境参数，构建AI预测模型。

结语