一、检测目的

1. 评估致敏风险：确定物质是否具有引发皮肤免疫反应的潜力。
2. 产品安全性验证：用于化妆品、药品、工业化学品等的上市前安全性评估。
3. 替代动物实验：推动体外检测技术的发展，减少实验动物使用。

二、核心检测项目与方法

1. 体内试验（传统动物模型）

• • 原理：通过皮内注射和局部涂抹受试物，评估致敏率。
  • 观察指标：皮肤红斑、水肿等过敏反应强度。
  • 适用性：历史数据丰富，但伦理争议较大。
• • 原理：通过测量小鼠耳后淋巴结细胞增殖程度判定致敏性。
  • 优势：减少动物痛苦，定量化数据更精准。

2. 体外替代试验（OECD认可方法）

• • 检测目标：评估物质与皮肤蛋白（半胱氨酸/赖氨酸肽）的结合能力。
  • 意义：致敏原需与皮肤蛋白结合形成完全抗原，此为致敏关键步骤。
• • 原理：利用人源THP-1单核细胞系，检测CD86和CD54表面标志物的表达上调。
  • 结果判定：标志物表达量超过阈值即判定为致敏物。
• • 检测机制：基于人角质形成细胞系的基因报告系统，检测抗氧化反应元件（ARE）通路的激活。
  • 适用性：模拟皮肤细胞对致敏原的早期响应。
• • 技术特点：使用重建的人源表皮模型，检测炎症因子（如IL-18）的释放。
  • 优势：更接近人体真实反应，适用于复杂混合物测试。

3. 计算机预测模型（QSAR）

• 原理：通过物质化学结构数据预测致敏性，适用于早期研发筛选。
• 代表工具：Toxtree、DEREK等。

4. 临床斑贴试验（人体试验）

• 适用阶段：产品上市后或临床试验阶段。
• 方法：将受试物贴敷于志愿者背部皮肤，观察48-72小时后的红斑、丘疹等反应。
• 伦理要求：需通过伦理审查，受试者知情同意。

三、检测流程标准化

1. 受试物准备：明确浓度、溶剂选择及稳定性测试。
2. 剂量选择：依据预期暴露量设定梯度浓度。
3. 对照设置：阳性对照（如DNCB）、阴性对照（生理盐水/溶剂）。
4. 结果判定：结合体外数据、剂量反应关系及机制证据综合评估。

四、国际法规与标准

• OECD指南：如TG 429（LLNA）、TG 442C（DPRA）、TG 442D（h-CLAT）等。
• 欧盟法规：REACH法规、化妆品禁令（EC 1223/2009全面禁止动物实验）。
• 中国标准：《化妆品安全技术规范》明确替代方法优先级。

五、应用领域

1. 化妆品：香精、防腐剂、染发剂等高风险成分筛查。
2. 药品：外用制剂（膏药、乳膏）的安全性评价。
3. 工业化学品：金属、树脂、染料等职业暴露风险评估。

六、挑战与趋势

• 组合策略（ITS）：联合多项体外试验提高预测准确性。
• 类器官与微流控技术：模拟复杂皮肤免疫微环境。
• 组学技术：通过蛋白质组学、代谢组学挖掘新型生物标志物。

结语