1. 家兔热原试验（Rabbit Pyrogen Test, RPT）

• 实验动物要求：选用体温稳定、体重大于1.5kg的健康家兔，实验前需标准化饲养。
• 温度监测：注射后3小时内每30分钟测量一次体温，对比基线值。
• 结果判定：若单只家兔体温升高≥0.5℃，或三只总和≥1.3℃，则判定为阳性。 优点：可检测多种热原（包括内毒素和非内毒素）。 缺点：动物伦理争议大，操作复杂，成本高。

2. 细菌内毒素试验（Bacterial Endotoxin Test, BET/LAL试验）

• 适用性：仅针对革兰阴性菌内毒素，需验证方法灵敏度（如0.03–5.0 EU/mL）。
• 样品处理：需消除干扰因素（如pH、离子强度），必要时稀释或调节pH。
• 限值设定：根据药典规定，如注射用水内毒素限值≤0.25 EU/mL。 优点：快速（1小时）、灵敏、可定量，替代家兔法趋势明显。 缺点：无法检测非内毒素热原。

3. 单核细胞激活试验（Monocyte Activation Test, MAT）

• 体外替代方法：符合3R原则（减少、优化、替代动物实验）。
• 灵敏度与特异性：可检测内毒素及非内毒素热原（如病毒组分）。
• 标准化挑战：需建立细胞活力、内毒素阳性对照和干扰验证体系。 优点：无需动物，适用于复杂生物制品（如疫苗、基因治疗产品）。 缺点：操作复杂，成本较高，尚在逐步推广中。

1. 药品领域
   • 注射剂（如抗生素、输液）：强制要求热原检测（优先采用BET）。
   • 生物制品（疫苗、血液制品）：需结合MAT以排除非内毒素热原。
2. 医疗器械
   • 植入物（心脏支架、人工关节）、导管：需通过浸提液进行LAL或RPT检测。
   • 一次性输液器具：内毒素限值需符合ISO 10993-1标准。
3. 生物材料与药品包装
   • 药用辅料（如明胶、脂质体）：需验证生产过程中热原控制。

1. 样品处理：避免高温破坏内毒素，强酸/碱样品需中和。
2. 方法选择：
   • 优先选择BET（药典推荐），若样品含非内毒素热原则需采用RPT或MAT。
3. 合规性要求：遵循《中国药典》、USP、EP及ISO 10993-12标准。
4. 常见争议问题：
   • 假阳性/假阴性：需排查操作误差（如试管污染或抑制剂干扰）。
   • 替代方法验证：需进行方法学确认（专属性、精密度、线性）。

1. 动物试验替代：MAT等体外方法逐步取代家兔法。
2. 高灵敏检测技术：自动化微流控芯片、CRISPR生物传感器等新技术的开发。
3. 标准化与国际化：药典方法协调（如ICH Q4B）。