尿酸检测试剂盒(尿酸酶法)技术说明
一、检测原理
- 尿酸酶催化反应:尿酸在尿酸酶作用下被氧化生成尿囊素、二氧化碳和过氧化氢(H₂O₂)。 反应式: 尿酸+O2+H2O→尿酸酶尿囊素+CO2+H2O2尿酸+O2+H2O尿酸酶尿囊素+CO2+H2O2
- 过氧化物酶显色反应:H₂O₂在过氧化物酶(POD)催化下与4-氨基安替比林(4-AAP)和3,5-二氯-2-羟基苯磺酸(DHBS)反应,生成红色醌类化合物。 反应式: H2O2+4-AAP+DHBS→POD红色化合物+H2OH2O2+4-AAP+DHBSPOD红色化合物+H2O
- 比色测定:通过测定505-546 nm波长处吸光度变化(ΔA),与尿酸浓度成正比。
二、检测项目核心参数
1. 样本类型
- 适用样本:
- 血清(推荐无溶血、无脂血样本)
- 血浆(肝素、EDTA抗凝)
- 尿液(需酸化防腐处理,推荐24小时尿)
- 样本处理要求:
- 血清/血浆:离心后分离上清液,避免反复冻融。
- 尿液:稀释10-20倍后检测(根据试剂盒说明调整)。
2. 检测范围
- 线性范围:
- 血清/血浆:0.1-20 mg/dL(6-1193 μmol/L)
- 尿液:0.5-100 mg/dL(需稀释后检测)
- 超限处理:
- 高于线性范围上限时,需用生理盐水稀释样本后复测。
3. 性能指标
指标 | 要求 | 典型数据(示例) |
---|---|---|
精密度 | 批内变异系数(CV) | ≤2.0%(浓度10 mg/dL时) |
批间变异系数(CV) | ≤3.5% | |
准确度 | 回收率 | 95%-105% |
灵敏度 | 最低检测限(LoD) | 0.05 mg/dL |
特异性 | 抗干扰能力(VC、胆红素等) | 抗维生素C ≤50 mg/dL;胆红素 ≤20 mg/dL |
4. 临床应用
- 主要适应症:
- 痛风:诊断及监测高尿酸血症。
- 肾脏疾病:评估尿酸排泄功能(如尿尿酸检测)。
- 代谢综合征:辅助诊断胰岛素抵抗相关疾病。
- 肿瘤溶解综合征:监测化疗后尿酸水平。
- 参考范围(成人):
- 血清/血浆:男性 3.4-7.0 mg/dL(202-416 μmol/L) 女性 2.4-6.0 mg/dL(143-357 μmol/L)
- 24小时尿尿酸:250-750 mg/24h(常规饮食)
5. 操作步骤(简化流程)
- 试剂配制:按说明书复溶干粉试剂。
- 加样:
- 样本管:3 μL样本 + 300 μL工作液。
- 空白管:3 μL蒸馏水 + 300 μL工作液。
- 孵育:37℃避光反应5分钟。
- 读数:在546 nm处测定吸光度(A),计算ΔA(ΔA = A样本 - A空白)。
- 结果计算: 尿酸浓度=Δ�样本Δ�标准品×标准品浓度尿酸浓度=ΔA标准品ΔA样本×标准品浓度
三、注意事项
- 干扰因素:
- 溶血(Hb>5 g/L)、乳糜血(TG>1000 mg/dL)可导致假性升高。
- 维生素C(>50 mg/dL)可能抑制显色反应,建议检测前询问用药史。
- 试剂保存:
- 未开封试剂2-8℃保存,有效期内使用;开封后避免污染。
- 质量控制:
- 每日检测需包含高、低值质控品,CV需符合实验室标准(≤5%)。
四、方法优势
- 特异性高:尿酸酶仅作用于尿酸,不受其他嘌呤类物质干扰。
- 灵敏度强:可检测低至0.05 mg/dL的尿酸浓度。
- 快速简便:全程检测时间<10分钟,适用于自动化生化分析仪。
五、总结
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