草鱼出血病概述

草鱼出血病（Grass Carp Hemorrhagic Disease, GCHD）是由草鱼呼肠孤病毒（Grass Carp Reovirus, GCRV）引起的一种急性、高致死性传染性疾病，主要危害草鱼苗种和成鱼。该病以体表、内脏器官出血为主要特征，传播速度快，死亡率可高达80%-90%，对水产养殖业造成巨大经济损失。近年来，随着养殖密度增加和气候变化，该病呈现区域性暴发趋势，因此科学、规范的检疫检测技术对疾病防控和养殖管理至关重要。

检测项目

草鱼出血病的检疫检测主要包括以下核心项目：

1. 病毒核酸检测：通过分子生物学方法检测样本中GCRV的核酸存在，如RT-PCR、实时荧光定量PCR等。

2. 血清学抗体检测：采用ELISA或免疫荧光技术检测鱼体血清中特异性抗体水平。

3. 病理学检查：观察病鱼组织切片中的细胞病变和出血特征。

4. 病毒分离与鉴定：通过细胞培养或实验动物接种进行病毒分离和毒力验证。

检测仪器

检测过程中需使用以下关键仪器设备：

1. PCR仪：用于病毒核酸的扩增和检测。

2. 荧光显微镜：观察免疫荧光标记的病毒抗原或组织病理变化。

3. 酶标仪：用于ELISA检测中吸光度的定量分析。

4. 超净工作台与细胞培养箱：保障病毒分离和细胞培养的无菌环境。

检测方法

目前主流的检测方法包括：

1. RT-PCR法：提取病鱼肝、肾等组织RNA，使用特异性引物扩增GCRV基因片段。该方法灵敏度高，可在感染早期检出病毒。

2. 免疫荧光技术（IFA）：将病毒特异性抗体与荧光标记物结合，通过荧光显微镜观察抗原-抗体反应，适用于组织切片和细胞培养物的快速检测。

3. ELISA检测：采用双抗体夹心法检测病毒抗原或IgM抗体，具有高通量、定量分析优势。

4. 组织病理学检查：对病鱼肝脏、脾脏进行石蜡切片和HE染色，观察细胞坏死、出血灶等典型病变。

检测标准

国内依据以下标准执行检测：

1. GB/T 15805.3-2018《鱼类检疫规程 第3部分：草鱼出血病》规定病毒分离与PCR检测的标准化流程。

2. OIE《水生动物疾病诊断手册》：要求检测实验室需通过能力验证，确保检测结果国际互认。

3. SN/T 1675-2013：明确了ELISA和免疫荧光技术的操作规范及结果判定阈值。

所有检测需在生物安全二级（BSL-2）实验室进行，检测报告应包含样本信息、检测方法、Ct值（如适用）和判定依据。