蓝舌病竞争酶联免疫吸附试验（cELISA）检测概述

蓝舌病（Bluetongue Disease, BT）是由蓝舌病毒（BTV）引起的一种非接触性、虫媒传播的动物传染病，主要感染反刍动物，尤其是绵羊、牛和山羊。该病可通过库蠓等媒介昆虫传播，对畜牧业造成严重经济损失。为有效防控疫情，快速、准确的检测技术至关重要。竞争酶联免疫吸附试验（cELISA）作为一种高特异性、高灵敏度的血清学检测方法，被广泛应用于蓝舌病抗体检测，为疫病监测、免疫评估和国际贸易检疫提供科学依据。

检测项目

蓝舌病cELISA检测主要针对血清或血浆中的抗BTV特异性抗体，尤其是针对病毒核心蛋白VP7的抗体。检测项目包括：
1. 动物血清样本中BTV抗体定性检测（阳性/阴性判定）；
2. 抗体水平半定量分析（通过抑制率计算）；
3. 不同血清型（BTV-1至BTV-27）的交叉反应性检测；
4. 免疫接种后抗体效价动态监测。

检测仪器与试剂

主要仪器设备包括：
- 酶标仪（450nm波长检测）
- 洗板机（自动或手动）
- 恒温培养箱（37℃±1℃）
- 微量移液器（单道、多道）
- 振荡器（用于试剂的混匀）
试剂组成通常包含：
- 预包被VP7抗原的微孔板
- 酶标单克隆抗体（HRP标记）
- 阳性对照血清和阴性对照血清
- TMB底物溶液、终止液
- 样品稀释液和洗涤缓冲液

检测方法

cELISA检测流程分为以下步骤：
1. 样品处理：血清样本按1:10至1:20比例稀释；
2. 抗原包被：微孔板预先包被BTV特异性抗原；
3. 竞争反应：加入待测样本和酶标抗体，37℃孵育60分钟；
4. 洗涤：用PBST缓冲液清洗未结合的成分；
5. 显色：加入TMB底物，避光显色10-15分钟；
6. 终止与读数：加入终止液后，立即用酶标仪测量OD450值；
7. 结果判读：计算抑制率（%）=（1-样本OD值/阴性对照OD均值）×100%，通常抑制率≥50%判为阳性。

检测标准

检测遵循以下国际和国内标准：
- OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》最新版
- GB/T 22917-2008《蓝舌病诊断技术》
- SN/T 1919-2007《蓝舌病竞争ELISA检测方法》
质量保证要求包括：
- 阴阳性对照OD值需符合试剂说明书范围
- 板内变异系数（CV）≤15%
- 重复样本检测结果一致性≥95%
- 实验室需定期参加能力验证（PT）