一、无菌检验的定义与适用范围

1. 最终灭菌产品：如注射剂、眼用制剂、植入性医疗器械等。
2. 非最终灭菌产品：需结合生产过程的无菌保障体系（如无菌生产工艺）。

二、核心检测项目

1. 常规微生物检测

• • 目标微生物：需氧条件下生长的细菌（如枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等）。
  • 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基（用于需氧及兼性厌氧菌）。
  • 培养条件：30~35℃，14天。
• • 目标微生物：专性厌氧菌（如产气荚膜梭菌）。
  • 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基（下层厌氧环境）。
  • 培养条件：30~35℃，14天，维持厌氧环境。
• • 目标微生物：霉菌和酵母菌（如白色念珠菌、黑曲霉）。
  • 培养基：沙氏葡萄糖液体培养基。
  • 培养条件：20~25℃，14天。

2. 特定病原体筛查（依产品风险增加）

• 示例项目：
  • 金黄色葡萄球菌（医疗器械、注射剂）
  • 铜绿假单胞菌（滴眼液、冲洗液）
  • 梭状芽孢杆菌（生物制品）

3. 培养基适用性检查

• 目的：验证培养基支持微生物生长的能力及无菌性。
• 关键指标：
  • 促生长能力：接种＜100 CFU的标准菌株，观察生长情况。
  • 抑菌特性：含防腐剂产品需验证中和效果。

4. 方法学验证

• 适用性试验：确认检测方法对样品的适用性（如抑菌性消除）。
• 阳性对照：加入标准菌株（如生孢梭菌、白色念珠菌），验证检测敏感性。

三、检测方法与技术

1. 薄膜过滤法（首选方法）

• 原理：通过孔径≤0.45 μm的滤膜截留微生物，冲洗后转移至培养基培养。
• 适用性：适用于水溶性液体、可溶解固体制剂。
• 优势：可消除样品抑菌性，提高灵敏度。

2. 直接接种法

• 原理：将样品直接接种至培养基中培养。
• 适用性：适用于无法过滤的样品（如油剂、混悬液）。
• 局限性：需验证中和剂有效性。

四、无菌检验流程

1. 样品预处理：根据产品特性选择溶解、稀释或中和处理。
2. 分装与接种：按标准操作分装至对应培养基。
3. 培养观察：按温度和时间要求培养，每日观察浑浊度变化。
4. 结果判定：
   • 阴性：所有培养基均澄清，判为无菌。
   • 阳性：任一培养基浑浊，需复检并调查污染源。

五、关键注意事项

1. 实验室环境控制：
   • 操作应在B级背景下的A级超净台或隔离器中进行。
   • 定期进行环境微生物监测。
2. 假阴性风险控制：
   • 避免抑菌性残留（充分冲洗或中和）。
   • 验证培养基促生长能力。
3. 假阳性风险控制：
   • 严格无菌操作技术，防止环境微生物污染。
   • 培养基预培养确认无菌性。

六、标准与法规依据

• 《中国药典》（ChP）：四部通则“1101 无菌检查法”。
• USP <71> Sterility Tests：美国药典标准。
• ISO 11737-2：医疗器械灭菌微生物学方法。

七、未来发展趋势

1. 快速检测技术：ATP生物发光法、流式细胞术替代传统培养法。
2. 自动化设备：全自动无菌检测系统减少人为误差。
3. 分子生物学技术：PCR、宏基因组学用于快速污染溯源。