热原检查法的检测项目详解

一、主要检测方法

1. • 原理：通过注射样品至家兔体内，监测体温变化判定热原存在。
   • 适用性：适用于无法用BET检测的样品（如某些浑浊或高黏度制剂）。
   • 检测项目：
     • 体温监测：注射后3小时内每30分钟记录体温。
     • 判定标准（如中国药典）：
       • 单只家兔升温≤0.5℃且总升温≤1.3℃为合格；
       • 单只升温≥0.6℃或总升温≥3.5℃为不合格。
2. • 原理：利用鲎血变形细胞裂解物与内毒素的凝胶化反应。
   • 适用性：快速、灵敏，广泛应用于注射剂、生物制品等。
   • 检测项目：
     • 凝胶法：观察是否形成凝胶判定结果（定性或半定量）。
     • 光度法：通过吸光度变化定量内毒素浓度。
     • 限值计算：根据公式 �=�/�L=K/M，其中 �K 为人用剂量阈值（5 EU/kg），�M 为最大给药剂量。

二、核心检测项目与流程

1. • 溶解/浸提：针对器械类样品，需用无热原水或特定溶剂浸提。
   • 稀释：调整浓度至BET检测范围内（通常0.125-0.5 EU/mL）。
2. • 验证条件：确认样品不抑制或增强鲎试剂反应（需通过添加标准内毒素验证）。
   • 调整措施：通过稀释、调节pH或过滤消除干扰。
3. • 阴性对照：无热原水或溶剂，确认试剂无污染。
   • 阳性对照：加入已知浓度内毒素，确保试剂灵敏度。
4. • BET合格标准：样品中内毒素含量低于规定限值（如注射用水≤0.25 EU/mL）。
   • 复测规则：初试不合格时，需进行复测或家兔法确认。

三、不同产品的检测要求

四、方法学验证与合规要求

1. • 灵敏度（λ）：确认鲎试剂标示灵敏度（如0.03 EU/mL）符合要求。
   • 重复性：同一样品多次检测结果一致。
   • 回收率：添加内毒素的回收率应在50%-200%。
2. • 药典差异：USP要求家兔法至少3只，而EP可能允许2只复测；BET限值需符合各区域标准。

五、新兴技术与替代方法

• 重组C因子法：无需鲎血，避免资源依赖，逐步被EP和USP收录。
• 体外热原测试：基于单核细胞激活的细胞因子检测（如IL-6），适用于复杂样品。

六、常见问题与解决方案

• 假阳性：避免环境或操作污染，使用无热原耗材。
• 假阴性：检查鲎试剂活性，确认未超过有效期。

七、总结