一、样本采集与处理

1. • 最佳时机：疟疾发热期（寒战发作后6-8小时），此时外周血中疟原虫密度最高。
   • 亚种差异：恶性疟原虫在外周血中仅见环状体和配子体，需结合临床判断。
2. • 末梢血：耳垂或指尖穿刺采集，快速制备血膜。
   • 静脉血：EDTA抗凝管采集，2小时内完成制片，避免虫体变形。
3. • 避免使用肝素抗凝（可能抑制染色）。
   • 样本需标记患者信息及采血时间，室温保存不超过48小时。

二、血膜制备与染色

（一）厚薄血膜制备

（二）染色方法

1. • 优点：细胞核（紫红色）与细胞质（蓝色）对比清晰，虫种鉴别更准确。
   • 步骤：血膜甲醇固定后，用10%吉姆萨染液染色15-30分钟，pH 7.2缓冲液冲洗。
2. • 快速法：无需预先固定，染色时间短（5-10分钟），适用于急诊筛查。
   • 局限性：细胞结构着色较浅，需经验判断。
3. • 染色液需定期过滤，避免沉淀干扰。
   • 染色后血膜应呈淡紫色，若偏红（pH过低）或偏蓝（pH过高）需调整缓冲液。

三、显微镜检查要点

（一）镜检流程

1. 低倍镜（10×）初筛：厚血膜扫描可疑区域（虫体呈蓝点状）。
2. 油镜（100×）确认：观察薄血膜中红细胞内虫体形态。
3. 计数规则：至少检查200个厚血膜视野或1000个红细胞（薄血膜）。

（二）疟原虫形态学鉴别

四、结果判读与报告规范

1. • 厚血膜：发现≥1个明确疟原虫。
   • 薄血膜：红细胞内典型虫体结构（需排除染色杂质干扰）。
2. • 明确标注疟原虫种类（如：恶性疟原虫、间日疟原虫）。
   • 混合感染需注明各虫种比例。
3. • 临床高度怀疑疟疾时，需连续3天复查血片。
   • 备注采样时间与患者发热史，避免假阴性。

五、质量控制与误差分析

1. • 假阴性：采血时机不当、血膜过厚、染色过度脱色。
   • 假阳性：血小板或染料沉淀误判为环状体。
2. • 双人复核阳性样本，疑难样本需上级实验室确认。
   • 定期参加WHO疟疾镜检能力测试（如EQA计划）。

六、镜检技术的局限性与发展

1. • 低原虫血症（<100个/μl）易漏诊，需结合快速抗原检测或PCR。
   • 依赖人员经验，培训周期长（≥6个月）。
2. • AI辅助图像识别系统：灵敏度达98%，可缩短诊断时间。
   • 数字显微镜远程会诊：适用于基层医疗机构。

结语