溶血性链球菌检验检测：核心检测项目详解

一、检测项目的分类及原理

1. 传统培养法

• 样本类型：咽拭子、伤口分泌物、血液、脑脊液（依感染部位而定）。
• 培养基选择：
  • 血琼脂平板：观察溶血现象（α/β/γ溶血）。β溶血（完全溶血）是A群链球菌的特征。
  • 选择性培养基（如哥伦比亚CNA血琼脂）：抑制革兰氏阴性菌生长，提高分离率。
• 培养条件：3537℃、5% CO₂环境培养2448小时。

2. 生化鉴定法

• 触酶试验：链球菌触酶阴性（区别于葡萄球菌）。
• Lancefield分群：通过乳胶凝集试验检测细胞壁多糖抗原（如A群抗血清凝集）。
• 生化反应：
  • PYR试验（吡咯烷酮芳基酰胺酶）：A群链球菌阳性。
  • CAMP试验：B群链球菌呈协同溶血。
  • 胆汁七叶苷水解：用于鉴别D群链球菌。

3. 分子生物学检测

• PCR技术：
  • 靶基因：如A群链球菌的 speB基因 或 emm基因，B群链球菌的 cfb基因。
  • 多重PCR：可同时检测多种致病基因。
• 实时荧光定量PCR（qPCR）：定量分析，灵敏度可达10²~10³ CFU/mL。
• 基因测序：用于毒力基因分型或耐药性分析（如红霉素耐药基因erm）。

4. 免疫学检测

• 胶体金试纸：检测A群链球菌抗原，15分钟内出结果。
• ELISA法：定量检测血清中抗链球菌溶血素O（ASO）抗体，辅助诊断风湿热。

二、样本采集与处理要点

• 临床样本：
  • 咽拭子：擦拭扁桃体区域，避免唾液污染。
  • 血液/脑脊液：无菌操作，立即送检。
• 食品样本（如乳制品）：按ISO标准进行均质化处理，增菌后接种培养基。
• 保存条件：2~8℃冷藏，4小时内送检；延迟送检需使用转运培养基。

三、检测结果解读与临床意义

四、特殊场景下的检测策略

1. 新生儿GBS筛查：
   • 孕晚期（35~37周）阴道/直肠拭子，采用qPCR或富集培养法。
2. 侵袭性感染诊断（如坏死性筋膜炎）：
   • 血液PCR联合培养，提高检出率。
3. 食品安全监测：
   • 采用ISO 9232标准，检测食品中的β-溶血链球菌限值。

五、技术进展与未来方向

• 微流控芯片技术：整合核酸提取、扩增及检测，实现“样本进-结果出”。
• MALDI-TOF MS：通过蛋白指纹图谱快速鉴定菌种，耗时仅需分钟。
• CRISPR-Cas系统：开发高特异性分子诊断工具，如SHERLOCK技术。

结语