传染性皮下和造血器官坏死病（IHHND）简介

传染性皮下和造血器官坏死病（Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Disease, IHHND）是一种由传染性皮下及造血器官坏死病毒（IHHNV）引起的水生甲壳类动物疾病，主要危害对虾养殖业，尤其是南美白对虾、斑节对虾等高经济价值品种。该病毒通过水平传播（水体、饵料、设备污染）和垂直传播（亲虾携带）扩散，感染后导致虾体生长迟缓、甲壳畸形、造血组织坏死等症状，严重时可造成幼体大量死亡。由于IHHND的隐蔽性强且早期症状不明显，精准、及时的检测技术对疫病防控和养殖管理至关重要。

核心检测项目与方法

1. 病原学检测

通过病毒分离培养结合电镜观察，直接检测样本中IHHNV的形态特征。需采集病虾的肝胰腺、鳃组织或胚胎等样本进行研磨处理，接种敏感细胞系（如Sf9昆虫细胞）进行病毒增殖，随后通过透射电镜观察病毒颗粒（直径约20-22 nm的无囊膜二十面体结构）。此方法特异性高，但耗时长且需专业实验室支持，多用于基础研究或疑难病例确诊。

2. 分子生物学检测

（1）常规PCR检测：针对IHHNV基因组保守区域（如非结构蛋白基因NS1）设计特异性引物，通过核酸提取、扩增和凝胶电泳判读结果。可检测低至10²拷贝/μL的病毒核酸，适用于养殖场日常监测。
（2）实时荧光定量PCR（qPCR）：利用TaqMan探针技术对病毒载量进行定量分析，灵敏度高达10¹拷贝/μL，可动态评估感染程度及治疗效果。
（3）环介导等温扩增（LAMP）：无需复杂仪器，在恒温（60-65℃）条件下1小时内完成扩增，通过浊度或荧光染料直接观察结果，适用于现场快速筛查。

3. 血清学检测

（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）：利用病毒特异性单克隆抗体检测样本中的IHHNV抗原，操作标准化且可批量检测，适用于亲虾群体筛查。
（2）免疫荧光技术（IFA）：通过荧光标记抗体与病毒抗原结合，在荧光显微镜下观察组织切片中的病毒分布，常用于病理机制研究。

4. 病理组织学检测

对感染虾的肝胰腺、造血组织进行石蜡切片和H&E染色，显微镜下观察特征性病变，如细胞核内包涵体形成、组织坏死及嗜碱性颗粒沉积。此方法需结合其他检测手段以提高诊断准确性，常用于疫病溯源分析。

5. 综合诊断技术

采用多重PCR、基因芯片或高通量测序（NGS）技术，同步检测IHHNV与其他常见虾类病原体（如WSSV、EMS），实现“一检多筛”，尤其适用于混合感染或复杂疫情场景。

检测流程标准化建议

养殖场应建立三级检测体系：
一级筛查：使用LAMP或免疫试纸条进行现场初筛；
二级确认：通过qPCR或ELISA在区域实验室复核阳性样本；
三级溯源：借助电镜观察或基因测序完成毒株分型与变异分析。同时需规范样本采集（活体取样后立即置于-80℃保存）、设置阴性/阳性对照，并定期进行实验室能力验证。

结语

针对IHHND的精准检测是阻断病毒传播链的核心环节。未来检测技术将向微型化（如微流控芯片）、智能化（AI图像识别）方向发展，结合区块链技术实现检测数据实时共享，为对虾养殖业的生物安全体系构建提供科技支撑。