果糖+葡萄糖含量（以干物质计）检测

在食品、农产品、饮料、蜂蜜、果葡糖浆等相关行业中，准确测定总还原糖的含量，特别是其中果糖和葡萄糖的加和含量，是一项至关重要的质量控制与营养评估指标。将结果表示为“以干物质计”，即基于产品中去除水分后的干基含量进行计算，是为了消除不同批次或不同产品间因水分含量差异造成的影响，从而提供更客观、可比较的糖分含量数据。这对于评价产品甜度、发酵性能、货架期稳定性以及是否符合相关法规标准（如纯蜂蜜的真伪鉴别、果葡糖浆的等级划分）具有核心意义。本检测项目旨在精确测定样品中果糖和葡萄糖的总和，并以干物质含量为基准进行标准化表达。

检测项目

本次检测的核心项目是：**样品中果糖与葡萄糖的总含量（Fructose + Glucose Content, expressed on a dry matter basis）**。具体内容包括：

• 定量测定样品中果糖（Fructose）的浓度。
• 定量测定样品中葡萄糖（Glucose）的浓度。
• 计算果糖与葡萄糖浓度的加和值。
• 测定或已知该样品对应的干物质（或总固形物）含量。
• 将测得的果糖+葡萄糖含量结果换算至以干物质为基准的数值（通常表示为 g/100g 干物质 或 % w/w 干基）。

检测仪器

完成此项目检测通常需要依赖高精度、高灵敏度的分析仪器，主要包括：

• 高效液相色谱仪： 配备示差折光检测器（HPLC-RID）或蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）是最为常用和推荐的方法。HPLC能够有效分离果糖、葡萄糖与其他糖类（如蔗糖、麦芽糖）及干扰物质。RID和ELSD对糖类响应良好，无需衍生化。
• 离子色谱仪： 配备脉冲安培检测器（IC-PAD），对糖类特别是单糖具有高选择性和灵敏度。
• 酶法分析系统： 使用特定的酶试剂盒（如己糖激酶/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶法测定葡萄糖，磷酸葡萄糖异构酶法测定果糖），通常在分光光度计或生化分析仪上进行。此法特异性强，但需要分别测定葡萄糖和果糖后再加和。
• 折光仪： 用于快速测定总可溶性固形物（Total Soluble Solids, TSS）含量，此数值通常近似作为干物质含量（或用于计算干物质含量），用于结果的干基换算。
• 烘箱/真空干燥箱： 用于直接测定样品的水分含量或干物质含量（参照标准干燥失重法）。
• 分析天平： 精确称量样品和标准品（精度至少0.0001g）。
• 超声波清洗器/恒温水浴锅/离心机： 用于样品前处理（溶解、提取、除蛋白、除杂、定容等）。
• 微孔滤膜与过滤器： 用于HPLC/IC进样前样品的过滤净化（常用0.45μm或0.22μm水相滤膜）。

检测方法

目前主流的、具有标准依据的检测方法有：

• 高效液相色谱法（HPLC-RID/ELSD）：
  1. 样品前处理： 精确称取代表性样品，用水或特定溶剂（如乙腈-水）溶解、稀释、定容。必要时进行超声助溶、离心、过滤（去除蛋白质、脂肪、颗粒物等干扰）。对于复杂基质，可能需采用固相萃取（SPE）、酶解（如淀粉需水解）或沉淀法纯化。
  2. 色谱条件： 使用氨基柱（如NH2柱）或糖分析专用柱，以乙腈-水混合溶液（如75:25或80:20 v/v）作为流动相（等度或梯度洗脱），流速通常为0.8-1.5 mL/min。柱温控制在30-40°C。RID检测器温度需恒定（通常30-40°C）。
  3. 标准曲线绘制： 用果糖和葡萄糖标准品配制系列浓度混合标准溶液，进样分析，绘制峰面积-浓度标准曲线。
  4. 样品测定与计算： 处理好的样品溶液进样分析，根据果糖和葡萄糖的保留时间定性，根据峰面积在各自标准曲线上查得浓度（C_样）。计算样品中果糖含量和葡萄糖含量，再相加得到果糖+葡萄糖总含量（mg/g 或 g/100g 湿基）。
• 离子色谱法（IC-PAD）： 前处理类似HPLC。使用高pH氢氧化钠/醋酸钠梯度溶液为淋洗液，金电极PAD检测。分离效果好，灵敏度高。
• 酶法：
  1. 葡萄糖测定： 使用己糖激酶（Hexokinase）和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（Glucose-6-phosphate dehydrogenase）试剂盒，在340nm监测NADPH的生成量计算葡萄糖含量。
  2. 果糖测定： 在完成葡萄糖测定的反应液中加入磷酸葡萄糖异构酶（Phosphoglucose isomerase），将样品中的果糖转化为葡萄糖-6-磷酸，继续反应并监测NADPH生成总量，减去第一步测得的葡萄糖对应的NADPH量，计算出果糖含量。最后将葡萄糖含量与果糖含量相加。
• 干物质含量测定：
  1. 折光法： 用折光仪测定样品的可溶性固形物含量（°Brix），此值在多数情况下（特别是糖溶液）可近似视为干物质含量（% w/w）。
  2. 烘箱干燥法（标准法）： 精确称取样品（m_湿）于已恒重的称量皿中，置于105±2°C烘箱（或特定真空/温度条件）中干燥至恒重（m_干）。干物质含量（DM, %）= (m_干 / m_湿) × 100%。
• 最终结果计算（以干物质计）： 果糖+葡萄糖含量（湿基, % w/w） = (C_果+葡 × V × F) / (m_样 × 1000) × 100%
  其中：C_果+葡为测得的果糖+葡萄糖浓度（mg/mL），V为定容体积（mL），F为稀释因子，m_样为称样量（g）。
  果糖+葡萄糖含量（以干物质计, % w/w） = [果糖+葡萄糖含量（湿基, % w/w） / 干物质含量（DM, % w/w）] × 100%

检测标准

为确保检测结果的准确性、可靠性和可比性，该项目的检测通常遵循以下国内外权威标准：

• GB 5009.8-2016 食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定： 中国国家标准，第一法即为高效液相色谱法（HPLC-RID）。详细规定了样品处理、仪器条件、计算方法和精密度要求。适用于食品中上述糖类的测定。
• GH/T 18796-2012 蜂蜜： 中国供销合作行业标准（商业部标准）。该标准规定了蜂蜜中果糖和葡萄糖含量（两者之和）的测定方法（通常采用HPLC法），并明确要求结果报告应包含“以干物质计”。是鉴别蜂蜜真伪和品质的关键指标。
• AOAC Official Method 977.20 / 980.13 / 982.14： 国际AOAC（国际分析
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