马源性成分检测：保障食品安全与贸易诚信的关键环节

在化食品供应链日益复杂的今天，确保食品标签的真实性与成分的准确性至关重要。马源性成分检测作为食品真实性和物种鉴定的重要手段，在多个领域扮演着极其关键的角色。其重要性主要体现在以下几个方面：

首先，它直接关系到消费者的权益和宗教信仰。某些宗教或文化习俗明确禁止食用马肉，消费者有权知晓并选择符合自身信仰和偏好的食品。其次，它能有效防止经济利益驱动下的食品欺诈行为，例如历史上欧洲曾发生的将马肉标注为牛肉的“马肉风波”，严重损害了市场诚信和消费者信任。再者，准确的物种识别对于食品安全监管、过敏原管理以及进出口贸易合规性（特别是涉及濒危野生物种国际贸易公约CITES管制的马科动物）都不可或缺。因此，建立准确、灵敏、可靠的方法来检测食品、饲料、药品或化妆品中是否含有马源性成分，已成为食品安全控制体系和市场监管不可或缺的一环。

核心检测项目

马源性成分检测的核心目标在于特异性识别并定量样品中来源于马（Equus caballus）的遗传物质（DNA）或蛋白质。主要检测项目包括：

1. 物种特异性DNA片段检测： 这是目前最主流、最准确的方法，通过检测马物种特有的基因序列（如线粒体细胞色素b基因、12S rRNA基因或核基因的特异性片段）来实现鉴定。
2. 物种特异性蛋白质检测： 主要针对热稳定且具有物种特异性的蛋白（如肌红蛋白、胶原蛋白），常用免疫学方法（如ELISA）进行检测。此方法可能受深度加工破坏影响。
3. 定量分析： 在确认含有马源性成分的基础上，进一步测定其在样品中的相对含量（如马源性DNA占所有动物源性DNA的比例），对于评估掺假程度或合规性至关重要。

主要检测仪器

马源性成分检测的准确性和灵敏度高度依赖于齐全的仪器设备：

1. 聚合酶链式反应仪： 这是DNA检测的核心设备，用于扩增靶向的马特异性DNA片段。其中，实时荧光定量PCR仪 (Real-time PCR/qPCR) 是当前最常用的设备，它不仅能够定性检测（有/无），还能实现精确定量，具有高灵敏度、高特异性、高通量和封闭操作减少污染等优点。
2. 核酸提取设备/工作站： 用于高效、稳定地从各种复杂样品（如肉制品、肉骨粉、饲料、皮革制品）中提取和纯化DNA。自动化工作站可提高效率和一致性。
3. 电泳系统： 用于常规PCR产物的分离和可视化（如琼脂糖凝胶电泳），在部分方法（如常规PCR）中用于结果确认。
4. 酶联免疫吸附测定仪（酶标仪）： 用于基于免疫学原理（如ELISA法）检测马源性蛋白质的吸光度值读取。
5. 测序仪： 当需要极高特异性或对未知/复杂样品进行鉴定时，用于对PCR产物进行DNA测序，将序列与数据库比对以确认是否为马源。下一代测序（NGS）技术也可用于复杂混合样品中多种动物源性成分的同时筛查，包括马源性成分。
6. 荧光信号检测系统： 集成于实时荧光定量PCR仪中，用于实时监测PCR扩增过程中的荧光信号变化。

常用检测方法

针对马源性成分的检测，主要有两类技术路线：

1. 基于DNA的分子生物学方法：

• 实时荧光定量PCR (Real-time PCR/qPCR)： 这是目前国际公认的金标准方法。利用马物种特异性引物和探针（通常针对线粒体基因，因其拷贝数高），在PCR扩增过程中实时监测荧光信号。根据扩增曲线和循环阈值（Ct值）进行定性和定量分析。其优点在于灵敏度极高（可检测到0.1%甚至更低的含量）、特异性强、速度快、可定量，且能有效区分近缘物种（如驴）。
• 常规PCR结合凝胶电泳： 使用特异性引物扩增马DNA片段，然后通过琼脂糖凝胶电泳观察预期大小的条带进行判断。该方法成本相对较低，但灵敏度、特异性和定量能力不如qPCR，且存在开盖污染风险，多用于初筛。
• 数字PCR (dPCR)： 一种新兴的绝对定量技术，不依赖标准曲线，对复杂基质抑制物耐受性更强，提供更高的准确度和精密度，尤其适用于痕量检测或标准曲线建立困难的情况。
• 环介导等温扩增 (LAMP)： 在恒温条件下快速扩增DNA，可通过浊度或荧光信号肉眼观察结果，适用于现场快速筛查，但特异性设计和定量能力是其挑战。

2. 基于蛋白质的免疫学方法：

• 酶联免疫吸附试验 (ELISA)： 利用抗马物种特异性蛋白质（如肌红蛋白）的抗体捕获样品中的马蛋白，通过酶促反应产生显色或荧光信号进行定性和半定量检测。适用于未深度加工或轻度加工样品，对设备要求相对较低，但可能受加工方式（高温高压）破坏抗原表位、与其他种属交叉反应以及无法定量DNA比例的影响。
• 免疫层析试纸条 (Lateral Flow Device)： 快速检测技术，通常用于现场初筛，提供“是/否”的结果，灵敏度和特异性通常低于ELISA和PCR。

主要检测标准

为确保检测结果的可靠性、可比性和法律效力，马源性成分检测需遵循国际或国家/地区的标准方法：

1. 国际标准：

• ISO 21571:2005 + Amd 1:2013: 《食物链微生物学 - 转基因生物体和衍生产品检测的分析方法 - 核酸提取》。规定了DNA提取的一般要求。
• ISO 20836:2021: 《食物链微生物学 - 食物和饲料中微生物的检测和量化用聚合酶链反应 (PCR) - 热循环仪的性能测试》。确保PCR仪性能达标。
• ISO 20395:2019: 《生物技术 - 核酸靶序列检测方法的性能要求 - 第1部分：术语、一般要求和性能特征定义；第2部分：基于核酸扩增的方法的样品制备、DNA分离和纯化》。为方法验证提供框架。
• 涉及物种鉴定的特定标准： 虽然没有专门针对马的单一ISO标准，但基于实时荧光PCR检测特定动物物种DNA的通用原则和验证要求在多个ISO标准（如涉及肉类鉴定的指南/技术规范）中均有体现。许多国家的方法标准（如欧盟参考实验室方法）常基于ISO框架。

2. 国内标准 (中国)：

• GB/T 20190-2006: 《饲料中牛羊源性成分的定性检测 定性聚合酶链式反应(PCR)法》。虽然主要针对牛/羊，但其原理、DNA提取、PCR操作及防污染要求是物种鉴定PCR的基础。
• GB/T 21101-2007: 《动物源性饲料中猪源性成分定性检测方法 PCR方法》。同样提供基础方法参考。
• GB/T 25165-2010: 《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法 实时荧光PCR法》。展示了实时荧光PCR在动物源性成分检测中的应用，包括对引物探针特异性、灵敏度验证的要求，是检测马源性成分的重要参考。
• SN/T 3731.5-2017: 《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第5部分：火鸡成分检测 PCR-测序法》。提供了PCR结合测序确认物种的方法示例。
• SN/T 2051-2008: 《食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法 实时PCR法》。是检测常见畜肉（包括可能涉及的马肉掺假）的重要标准。
• 行业/地方/实验室标准： 许多检测机构或实验室会根据国际标准和自身验证数据，建立内部经过验证的马源性成分实时荧光PCR检测标准操作规程(S
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