传染性造血器官坏死病（IHN）检疫检测概述

传染性造血器官坏死病（Infectious Hematopoietic Necrosis, IHN）是由传染性造血器官坏死病毒（IHNV）引发的一种高度传染性鱼类疾病，主要危害鲑科鱼类（如虹鳟、大西洋鲑等），可导致幼鱼死亡率高达90%以上。该病被世界动物卫生组织（WOAH）列为须申报的水生动物疫病，对水产养殖业构成重大威胁。检疫检测是防控IHN传播的核心手段，通过早期发现、精准诊断和严格管控，可有效阻断病毒扩散，保护养殖产业安全。

主要检测项目

IHN的检疫检测涵盖临床症状观察、病原学检测和分子生物学分析三大方向：
1. 临床症状检测：观察鱼体是否出现体色发黑、腹部膨大、眼球突出、鳃丝苍白及内脏出血等典型症状。
2. 病毒分离培养：采集病鱼肾脏、脾脏等组织样本，接种敏感细胞系（如EPC、CHSE-214细胞）进行病毒培养。
3. 分子生物学检测：采用RT-PCR、实时荧光定量PCR（qPCR）或逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）技术检测病毒核酸。
4. 血清学检测：通过酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫荧光抗体试验（IFAT）检测特异性抗体。

常用检测仪器

检测过程中需使用多种专业仪器设备：
- PCR仪（常规/实时荧光型）
- 核酸提取仪
- 凝胶成像系统
- 生物安全柜
- 倒置荧光显微镜
- 恒温培养箱（用于细胞培养）
- 高速离心机
- 酶标仪（ELISA检测用）

核心检测方法

1. RT-PCR检测法：
提取样本RNA后，使用特异性引物（如针对病毒G蛋白基因的引物组）进行逆转录PCR扩增，通过电泳分析产物条带判定结果。
2. 细胞培养法：
将组织匀浆液接种敏感细胞系，观察3-7天内是否出现细胞病变效应（CPE），结合免疫荧光染色确认病毒存在。
3. 实时荧光定量PCR：
采用TaqMan探针技术，可在2小时内完成病毒核酸的定量检测，灵敏度达10-100拷贝/反应。

检测标准依据

IHN检测需严格遵循国际及国家技术规范：
- 《WOAH陆生和水生动物诊断试验手册》（2023版）第3.1.2章
- GB/T 15805.3-2018《鱼类检疫方法 第3部分：传染性造血器官坏死病毒(IHNV)》
- SN/T 1675-2019《传染性造血器官坏死病检疫技术规范》
- ISO/TS 15216-2:2019《食物链微生物学-病毒检测方法》相关要求

质量控制要点

检测过程需实施严格质控：
- 设置阳性对照（IHNV标准毒株）和阴性对照（无核酸水）
- 定期验证检测试剂的灵敏度和特异性
- 实验环境符合生物安全二级（BSL-2）标准
- 操作人员需通过专业生物安全培训