猪繁殖与呼吸综合征诊断检测概述

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）是由PRRS病毒引起的一种高度接触性传染性疾病，对养猪业造成重大经济损失。该病以妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎及仔猪呼吸道症状为主要特征，临床诊断需结合流行病学、病理学与实验室检测。随着分子生物学技术的进步，检测方法不断优化，精准性和效率显著提升，助力早期发现和疫情控制。

检测项目

PRRS诊断检测主要包括以下项目：

• 病原检测：直接检测病毒核酸或抗原，适用于急性感染期样本。
• 抗体检测：通过血清学方法检测感染后产生的抗体，用于群体免疫状态评估。
• 鉴别诊断：排除猪瘟、伪狂犬病等临床症状相似的疫病。

检测仪器

常用检测仪器包括：

• 实时荧光定量PCR仪：用于病毒RNA的快速定量检测，灵敏度高。
• 酶标仪（ELISA检测系统）：适用于血清抗体的大规模筛查。
• 核酸提取仪：自动化提取样本中的病毒核酸，减少人为误差。
• 凝胶成像系统：用于RT-PCR产物的电泳分析。

检测方法

PRRS诊断技术主要分为三类：

• 分子生物学检测
  • RT-PCR/实时荧光RT-PCR：针对ORF5、ORF7等基因片段进行扩增，特异性强，检测限可达10²拷贝/μL。
  • 巢式PCR：提高低浓度样本的检出率，但需注意交叉污染风险。
• 血清学检测
  • ELISA（间接法/阻断法）：检测IgG抗体，适用于群体监测，如IDEXX PRRS X3抗体检测试剂盒。
  • 免疫荧光试验（IFA）：用于抗体效价测定，操作复杂但结果直观。
• 病毒分离培养：使用Marc-145细胞系分离病毒，耗时长但可获取活毒株。

检测标准

PRRS检测需遵循以下标准：

• 国际标准：世界动物卫生组织（OIE）《陆生动物诊断试验和疫苗手册》中规定的操作流程。
• 国家标准：中国《GB/T 22915-2008 猪繁殖与呼吸综合征诊断技术》规范了RT-PCR和ELISA方法。
• 行业规范：实验室需通过生物安全二级（BSL-2）认证，检测试剂应获得农业农村部批文。

质量控制与注意事项

检测过程中需重点关注：

• 样本采集：选择发病急性期的肺脏、淋巴结或血清，低温运输避免RNA降解。
• 交叉验证：ELISA阳性样本建议用PCR复检，降低假阳性率。
• 基因分型：针对北美型（Type 2）和欧洲型（Type 1）设计特异性引物。