赤羽病检疫检测概述

赤羽病（Akabane disease）是由赤羽病病毒（Akabane virus，AKAV）引起的一种虫媒性动物传染病，主要感染牛、羊等反刍动物，可导致流产、死胎、胎儿畸形及新生幼畜运动神经系统障碍。该病毒属于布尼亚病毒科（Bunyaviridae）正布尼亚病毒属，通过库蠓等吸血昆虫传播，具有显著的季节性和地域性特征。随着国际贸易和动物流动增加，赤羽病的跨境传播风险升高，因此检疫检测成为防控该病的关键环节。

赤羽病检疫检测需覆盖病原体筛查、抗体检测和流行病学分析，重点关注妊娠动物、新生畸形幼畜及媒介昆虫的监测。检测体系需结合临床症状观察、实验室诊断技术及分子生物学方法，形成多维度防控网络。

检测项目

1. 病原学检测：包括病毒分离培养、抗原检测及核酸检测
2. 血清学检测：IgG/IgM抗体水平测定（中和试验、ELISA）
3. 分子生物学检测：RT-PCR、实时荧光定量PCR（qPCR）
4. 病理组织学检测：脑脊髓炎病变及肌肉组织损伤分析
5. 媒介昆虫筛查：库蠓等传播媒介的病毒携带检测

检测仪器

• 实时荧光定量PCR仪（用于病毒核酸扩增与定量）
• 酶标仪（ELISA试验抗体检测）
• 生物安全三级实验室（BSL-3）病毒培养系统
• 超低温冰箱（-80℃病毒样本保存）
• 荧光显微镜（免疫荧光法观察抗原分布）
• 高速离心机（病毒颗粒分离纯化）

检测方法

病毒分离与鉴定：
1. 采集流产胎儿脑组织、胎盘或媒介昆虫样本
2. 接种BHK-21、Vero等敏感细胞系进行病毒培养
3. 通过细胞病变效应（CPE）观察及免疫荧光法确认病毒存在

血清学检测技术：
• 病毒中和试验（VNT）：检测特异性中和抗体，金标准方法但耗时较长
• 间接ELISA法：使用重组核衣壳蛋白（N蛋白）作为包被抗原，2小时内快速筛查群体抗体水平

分子检测技术：
• RT-PCR：针对病毒S基因片段设计引物，检测灵敏度可达10²拷贝/μL
• 多重qPCR：同时检测AKAV与其他虫媒病毒（如施马伦贝格病毒）
• 宏基因组测序：用于新发变异株的基因组解析

检测标准

• 国际标准：OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（2023版）第3.1.1章
• 中国标准：GB/T 35910-2018《赤羽病诊断技术》
• 采样规范：流产胎儿需采集脑、脊髓及胎盘组织，血清样本需-20℃保存运输
• 结果判定：
  - PCR阳性且测序一致性≥95%可确诊
  - 双份血清中和抗体效价升高4倍及以上判为活动性感染
• 质量控制：每批次检测需设置阳性对照（AKAV标准毒株）和阴性对照（PBS）

结语

赤羽病的有效防控依赖于高灵敏度的检测技术和标准化的操作流程。当前检测体系已形成以分子诊断为核心、血清学筛查为补充的立体化方案，但需持续关注病毒变异对检测靶标的影响。建议疫区定期开展媒介昆虫监测，并结合疫苗接种建立综合防控策略。