动物骨髓嗜多染细胞微核试验检测概述

动物骨髓嗜多染细胞微核试验（Micronucleus Test in Bone Marrow Polychromatic Erythrocytes）是一种经典的遗传毒性检测方法，广泛应用于药物安全性评价、环境污染物监测及化学品毒理学研究。该试验通过观察骨髓中未成熟红细胞（即嗜多染细胞）内微核的形成情况，快速评估受试物对染色体的损伤能力。微核是细胞分裂过程中因染色体断裂或纺锤体功能障碍产生的游离核小体，其数量与遗传物质损伤程度呈正相关。由于嗜多染细胞生命周期短且对损伤敏感，该试验具有检测周期短、灵敏度高、操作简便的特点，被国际组织（如OECD、ICH）列为遗传毒性筛选的核心方法之一。

检测项目

本试验的核心检测项目包括：（1）微核率（每1000个嗜多染细胞中微核的数量）；（2）嗜多染细胞与成熟红细胞（正染细胞）的比值（P/N值），用于评估受试物对细胞增殖的影响；（3）细胞形态学观察，排除假阳性干扰；（4）剂量-效应关系分析，确定受试物的遗传毒性阈值。其中微核率是判定遗传毒性的关键指标，通常以阴性对照组的2倍或统计学显著差异作为阳性判断标准。

检测仪器

试验所需主要仪器包括：（1）光学显微镜（配备油镜及显微成像系统）；（2）高速离心机（用于骨髓细胞分离）；（3）细胞计数器；（4）自动染色机（用于吉姆萨染色）；（5）生物安全柜（保障无菌操作）；（6）流式细胞仪（可选，用于高通量分析）。显微镜需配置100倍油镜以满足微核（直径1/5-1/3主核）的精确观察要求，成像系统应具备自动计数和图像存档功能。

检测方法

标准检测流程分为四个阶段：（1）动物处理：选用SPF级啮齿类动物（通常为大鼠或小鼠），按体重梯度设置至少3个剂量组，经口或腹腔注射给予受试物，同时设立阴性与阳性对照组；（2）骨髓取样：末次给药后24小时处死动物，取股骨骨髓用胎牛血清制备细胞悬液；（3）制片与染色：离心去除脂肪层后制片，经甲醇固定、吉姆萨染色，使嗜多染细胞（灰蓝色）与正染细胞（粉红色）区分明显；（4）镜检分析：每只动物至少观察2000个嗜多染细胞，记录微核数量，计算微核率并通过统计学方法判定结果显著性。

检测标准

本试验严格遵循国际与国内标准：（1）OECD 474指南《哺乳动物红细胞微核试验》；（2）GB/T 21794-2008《化学品 哺乳动物骨髓染色体畸变试验方法》；（3）ISO 10993-3医疗器械生物学评价第3部分；（4）ICH S2(R1)药物遗传毒性试验标准。试验需满足以下质量控制要求：阳性对照组微核率≥3‰、阴性对照组≤1.5‰、P/N值≥0.1，实验室需定期进行方法学验证并参与国际环测比对。数据报告需包含个体动物数据、统计方法及剂量-反应曲线等关键信息。