一、菌种纯度检测

1. • 菌落观察：在PDA培养基上，正常黑木耳菌丝呈白色绒毛状，均匀致密；若出现颜色异常（绿、黄、灰等）或菌落形态差异，可能为霉菌或细菌污染。
   • 显微镜检查：通过革兰氏染色或乳酸酚棉蓝染色，观察是否存在酵母菌、放线菌等杂菌孢子或菌丝结构。
2. • ITS序列分析：提取菌丝DNA，扩增ITS（内转录间隔区）序列并与数据库比对，快速鉴定菌种是否混杂其他真菌。

二、菌种活力检测

1. • 在25℃恒温条件下，测量菌丝在PDA培养基上的日扩展距离（mm/d），优质菌种日生长量应≥3.5mm。
2. • 使用氧电极法测定菌丝呼吸速率，高活力菌种耗氧量通常在0.8~1.2μmol O₂/(g·min)范围。
3. • 将菌种接种于液体培养基中，摇床培养72小时后镜检，观察菌丝断片萌发率（应≥95%）。

三、遗传特性检测

1. • SSR/ISSR标记：通过多态性片段分析，建立菌株DNA指纹图谱，比对不同代次菌种的一致性。
   • RAPD技术：随机扩增多态性DNA，快速筛查遗传变异。
2. • 黑木耳为四极性异宗结合真菌，需通过PCR检测待测菌株的A1A2/B1B2交配型基因，验证其遗传信息是否完整。

四、农艺性状检测

1. • 模拟栽培条件（湿度85%、温度18~25℃），记录菌袋现耳时间、耳片厚度及形态均匀度。优质菌种现耳周期≤35天，畸形耳率＜5%。
2. • 耐高温性：32℃环境处理48小时，恢复培养后菌丝存活率需＞80%。
   • 抗杂菌能力：接种常见竞争杂菌（如木霉），观察抑制圈直径是否≥2cm。

五、安全性检测

1. • 采用ICP-MS法检测菌丝中铅、镉、砷、汞含量，需符合《GB 2762-2022 食品中污染物限量》要求。
2. • 针对菌种生产过程中可能使用的杀菌剂（如多菌灵），通过HPLC-MS/MS检测，残留限量需低于0.01mg/kg。
3. • 依据《GB 4789系列标准》，检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌，结果应为阴性。

六、菌种保存稳定性检测

1. • 连续转接5代后，检测菌丝生长速率及出耳性状，退化率应＜10%。
2. • 4℃下保存6个月，复苏后菌丝活力需保持初始值的90%以上。

七、检测标准与规范

• 国家标准：《GB 19171-2003 黑木耳菌种》
• 行业规程：《NY/T 1098-2018 食用菌菌种真实性鉴定 SSR分子标记法》

结语