- DNS比色法（3,5-二硝基水杨酸法）
- 原理：还原糖在碱性条件下将DNS还原为氨基化合物，生成棕红色产物
- 波长：540nm，检出限0.2-1.5mg/mL
- 适用范围：植物提取物、发酵液等复杂体系
- 斐林试剂法
- 分步滴定法测定还原糖含量，通过氧化还原反应终点判断
- 精度高但操作繁琐，适用于标准品测定
- 浓硫酸使糖类脱水生成糠醛衍生物，与蒽酮形成蓝绿色络合物
- 检测波长620nm，线性范围10-100μg/mL
- 需注意多糖需完全溶解，避免结晶干扰
- 苯酚-硫酸法
- 糖类在浓硫酸作用下生成羟甲基糠醛，与苯酚缩合显橙黄色
- 波长490nm，适合微量检测（5-100μg）
- 酸水解法联用HPLC
- 6mol/L HCl 110℃水解2小时，色谱柱分离后示差检测
- 可区分单糖组成，适用于结构分析
- 样品前处理规范
- 新鲜样品需80℃灭酶15min
- 乙醇梯度提取去除干扰色素
- 离心参数：10,000g，15min，4℃
- 标准曲线验证
- 葡萄糖标准品需经干燥恒重处理
- 曲线相关系数R²≥0.995方为有效
- 每批次检测需同步制作标准曲线
- 干扰物质控制
- 蛋白质：添加5%三氯乙酸沉淀
- 多酚类：PVPP吸附处理
- 离子干扰：透析法去除金属离子
- 食品工业：蜜饯类产品还原糖需＞60%（GB 14884-2016）
- 作物育种：小麦灌浆期可溶性总糖＞18%预示高产潜力
- 发酵监控：酒精发酵液中还原糖＜0.5%判定发酵终点
- 温度敏感性：显色反应需严格控温±1℃
- 时间控制：蒽酮法显色后需15min内完成测定
- 仪器校准：分光光度计需每日用重铬酸钾溶液校验
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