赭曲霉毒素B检测：保障食品安全的关键环节

赭曲霉毒素B(Ochratoxin A, OTA)是由曲霉属(如赭曲霉)和青霉属某些菌株产生的次级代谢产物，是一种具有强肾毒性、肝毒性、免疫抑制、致畸性和致癌性(被国际癌症研究机构IARC归为2B类)的真菌毒素。它在范围内广泛污染谷物(如小麦、玉米、大麦、燕麦)、咖啡豆、葡萄及葡萄酒、香料、干果以及动物饲料等。由于其理化性质稳定，能在食物链中累积并最终进入人体，对食品安全和人类健康构成严重威胁。因此，建立准确、灵敏、高效的赭曲霉毒素B检测方法，对于监控农产品的污染状况、执行食品法规限量标准、保障消费者食用安全和促进国际贸易至关重要。

检测项目

赭曲霉毒素B检测的核心目标是定量或定性地测定各类食品、农产品、饲料及部分动物源性食品(如猪肾)中OTA的含量。主要检测项目聚焦于：谷物及其制品(面粉、面包、早餐谷物等)、咖啡及咖啡制品、葡萄酒/葡萄汁/葡萄干、啤酒、香料、婴幼儿食品、饲料原料及成品饲料等。检测结果需严格对照国家及国际法规设定的最大残留限量(MRL)进行评判。

检测仪器

现代赭曲霉毒素B检测依赖于多种精密分析仪器，以确保结果的准确性和可靠性：

1. 液相色谱仪(LC): 尤其高效液相色谱(HPLC)是检测OTA的主流仪器，常配备荧光检测器(FLD)。由于OTA具有天然荧光特性，HPLC-FLD方法灵敏度高、选择性好、应用广泛。

2. 液相色谱-串联质谱联用仪(LC-MS/MS): 目前公认的“金标准”技术。具有极高的选择性和灵敏度，能有效排除复杂基质干扰，实现痕量(ppb甚至ppt级)OTA的准确定量，并能同时检测多种真菌毒素。特别适用于法定确认分析和仲裁。

3. 免疫分析仪器： 包括酶联免疫吸附测定(ELISA)微孔板读数仪、荧光免疫层析/光激化学发光读数仪等。基于抗原抗体特异性反应，适用于大批量样品的快速筛查。

4. 样品前处理设备： 如免疫亲和柱(IAC)操作装置、固相萃取(SPE)装置、均质器、振荡器、离心机、氮吹仪等，用于高效净化和富集样品中的OTA。

检测方法

赭曲霉毒素B的检测通常包含样品提取、净化和仪器分析三个主要步骤：

1. 样品提取： 常用酸性或中性有机溶剂(如乙腈-水-乙酸混合液、甲醇-水混合液)进行振荡或均质提取，将OTA从复杂的基质中溶解出来。

2. 净化： 关键步骤，用于去除干扰物质。主要方法包括：
• 免疫亲和柱(IAC)净化： 利用OTA特异性抗体，选择性吸附目标物，洗脱后得到高纯度OTA溶液。净化效果优异，是LC-FLD和LC-MS/MS常用的前处理方法。
• 固相萃取(SPE)净化： 利用C18、Mycosep多功能净化柱等，基于吸附剂与目标物/干扰物不同的亲和力进行分离。

3. 仪器分析：
• HPLC-FLD法： 经IAC或SPE净化的样品，在HPLC上进行分离。OTA在激发波长~333nm、发射波长~460nm处有强荧光响应，通过峰面积或峰高外标法定量。方法成熟、稳定，是常用的标准方法。
• LC-MS/MS法： 净化后的样品进入LC-MS/MS系统。色谱分离后，OTA在质谱中通过特定的母离子/子离子对(如m/z 404 → 239, 358)进行多重反应监测(MRM)，实现高灵敏度、高选择性的定性和定量。是确证和痕量分析的首选。
• ELISA法： 将提取液(通常需稀释)加入包被了OTA抗体的微孔板中，再加入酶标记的OTA(竞争法)或酶标记的二抗(间接法)，通过底物显色，用酶标仪测定吸光度。吸光度值与OTA浓度呈反比，通过标准曲线定量。操作相对简便，适合大批量筛查。

检测标准

赭曲霉毒素B的检测和限量标准由各国政府和国际组织制定，为检测提供法定依据和评价基准：

• 国际食品法典委员会(CAC): 为协调贸易，CAC制定了谷物、葡萄酒等产品中OTA的限量标准和推荐检测方法(如Codex Stan 193)。

• 欧盟(EC): 拥有最严格的OTA限量法规。主要规定(如EU No 1881/2006及其修订版)涵盖谷物、葡萄干、咖啡、葡萄酒、婴幼儿食品等多种产品。同时，欧盟发布了官方检测方法(如EN 14132:2009 - HPLC-FLD法测定食品中OTA)。

• 中国：
- 限量标准: 主要依据《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》(GB 2761-2017)，对谷物、豆类、葡萄酒、咖啡等规定了OTA的最大限量。
- 检测方法标准: 国家标准提供了多种可靠方法：
    • GB 5009.96-2016 《食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定》 - 规定了HPLC-FLD法、HPLC-MS/MS法、ELISA法。
    • GB/T 30957-2014 《饲料中赭曲霉毒素A的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》。
    • GB 5009.222-2016 《食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法》等。

• 美国： FDA虽未设定OTA的法定限量，但发布了指导值(Guidance Levels)。美国官方化学家协会(AOAC)和国际谷物科技协会(ICC)也发布了认可的检测方法(AOAC Official Methods, ICC Standards)。

综上，赭曲霉毒素B的检测是一个技术集成度高的过程，需要根据检测目的(筛查/确证)、样本基质、预算和法规要求，选择合适的检测方法(ELISA/HPLC/LC-MS/MS)和对应的国家标准或国际标准。高效的样品前处理(特别是IAC净化)与高灵敏、高特异的分析仪器(尤其是LC-MS/MS)相结合，是获得准确可靠检测结果、确保食品安全防线的重要保障。