猪痢疾检疫检测的重要性及技术要点

猪痢疾（Swine Dysentery）是由猪痢疾短螺旋体（Brachyspira hyodysenteriae）引起的一种高度传染性肠道疾病，临床表现为黏液性、出血性腹泻和脱水，对生猪养殖业造成重大经济损失。开展系统性检疫检测是防控疫情扩散、保障养殖安全的核心环节。检疫工作需覆盖临床症状观察、实验室检测和流行病学调查，其中实验室检测技术因其高灵敏度和特异性成为确诊的关键依据。

一、核心检测项目

1. 病原学检测：通过检测粪便或肠道组织中的病原体，包括镜检观察螺旋体形态、细菌分离培养及PCR鉴定。
2. 血清学检测：检测血液中特异性抗体水平，常用ELISA法评估感染状态。
3. 分子生物学检测：基于16S rRNA基因设计引物，通过实时荧光定量PCR实现快速精准检测。

二、关键检测仪器

1. 光学显微镜（1000倍油镜）：用于观察染色后的螺旋体形态特征
2. 荧光PCR仪：实现DNA扩增及定量分析
3. 厌氧培养箱：提供螺旋体分离培养的专用环境（37℃、含5% CO₂）
4. 酶标仪：ELISA检测抗体时读取吸光度值
5. 高速离心机：用于样本前处理中的病原富集

三、标准化检测方法

1. 样本采集规范：
   - 急性期采集新鲜粪便或直肠拭子
   - 剖检时取结肠黏膜刮取物
   - 血液样本需无菌采集后分离血清

2. 直接镜检法：
   样本经革兰氏染色或吉姆萨染色后，观察螺旋体特征（长6-8μm，2-4个弯曲）

3. 分离培养法：
   使用选择性培养基（如TSA加5%脱纤羊血）进行厌氧培养，菌落需经生化试验和PCR确认

4. 荧光定量PCR：
   采用特异性引物（如Bhyo-16S-F/R）进行扩增，检测阈值循环数（Ct值）≤35判为阳性

5. ELISA检测：
   使用重组脂蛋白Bhlp29.7作为包被抗原，OD450值高于临界值0.3时判定为阳性

四、主要检测标准

1. 国家标准：GB/T 34742-2017《猪痢疾诊断技术》规定病原分离及PCR检测流程
2. OIE标准：《陆生动物诊断试验和疫苗手册》第四章3.8节推荐的检测方案
3. 行业规范：NY/T 548-2015《猪痢疾检疫技术规范》明确样本处理要求

（注：检测结果需结合临床表现综合判断，阳性样本应及时进行药敏试验指导临床用药。新发疫情需按《动物防疫法》规定启动应急预案。）